Avtor/Urednik     Rupreht, R; Plemenitaš, A
Naslov     Use of antibodies in the system of semi-intact cells
Prevedeni naslov     Uporaba protiteles v sistemu semi-intaktnih celic
Tip     članek
Vir     Farm Vestn
Vol. in št.     Letnik 47, št. 3
Leto izdaje     1996
Obseg     str. 287-92
Jezik     eng
Izvleček     HMGCoA reduktaza je glavni regulatorni encim v biosintezi holesterola. Encim je integralni protein endoplazemskega retikuluma. Aktivnost HMGCoA reduktaze je regulirana na ravneh transkripcije in translacije (long term), prav tako pa tudi na potranslacijski ravni (short term)(1). Sistem semi-intaktnih celic CHO-215, ki so avksotrofne za holesterol, se je izkazal kot uporaben za študij vpliva holesterola na aktivnost HMGCoA reduktaze na potranslacijski ravni. Pri pripravi takšnega sistema nastanejo v celični membrani dovolj velike pore, da omogočajo prost prehod proteinov in drugih manjših molekul iz citosola, znotrajcelični organeli pa ostanejo intaktni (2). Pri našem delu smo poskušali v sistem semi-intaktnic celic CHO-215 vnesti protitelesa, specifična za membranski oziroma katalitski del encima HMGCoA reduktaze. Namen je bil ugotoviti ali je mogoče na ta način proučevati mehanizme regulacije HMGCoA reduktaze. Protitelesa so prodrla v celice in dosegla encim HMGCoA reduktazo, kar se je odrazilo v zmanjšanju encimske aktivnosti. Stopnja zmanjšanja je bila odvisna od vrste uporabljenih protiteles, njihove koncentracije in časa inkubacije. Kontrolni eksperimenti, ki smo jiih naredili z intaknimi celicami, so pokazali, da protitelesa v intaktne celice ne morejo podreti. Ob dodatku protiteles intaktnim celicam nismo zaznali nobene spremembe v encimski aktivnosti. Uporabnost sistema semi-intaktnih celic se je pokazala tudi pri uporabi komercialno dostopnih anti-fosforinskih, anti-fosfotreoninskih in anti-fosfotirozinskih protiteles. Ob dodatku teh protiteles k sistemu semi-intaktnih celic ni bilo zmanjšanja encimske aktivnosti, ravno nasprotno, aktivnost se je celo povečala. Tak rezultat je v skladu s pričakovanji, saj vemo, da regulacijski mehanizmi HMGCoA reduktaze potekajo preko procesov fosforilacije in defosforilacije.
Deskriptorji     CHO CELLS
HYDROXYMETHYLGLUTARYL COA REDUCTASES
CHOLESTEROL
HAMSTERS
ANTIBODIES
MODELS, BIOLOGICAL